细胞周期蛋白1结合蛋白抗体​的生物素化标记实验要点

细胞周期蛋白1结合蛋白抗体的生物素化标记实验要点：

1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析；

2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件；

3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活；

4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等；

5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性；

6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合；

7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用；

8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。

APP/ABPP淀粉样肽前体蛋白抗体

甲胎蛋白单克隆抗体（包被）

甲胎蛋白单克隆抗体(检测)

ADP核糖基化因子结合蛋白1抗体

芳香烃受体抗体

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腺苷三磷酸结合盒转运体A1抗体

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腺苷A2A受体抗体

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顶膜钠依赖性胆盐转运体蛋白抗体

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ACN9蛋白抗体

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腺苷酸激酶抗体

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