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台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒使用方法

发表时间:2021-04-19 16:11

台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒使用方法:

一、样品的准备:

方法一:LDH释放检测

a.根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养板中,使待检测时细胞密度不超过80-90%满。

b.吸去培养液,用PBS液洗涤一次。换新鲜培养液(推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液),将各培养孔分成如下几组:包括无细胞的培养液孔(背景空白对照孔),未经药物处理的对照细胞孔(样品对照孔),未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔(样品**酶活性对照孔),以及药物处理的细胞孔(药物处理样品孔),并做好标记。按照实验需要给予适当药物处理(如加入0-10μl左右特定的药物刺激,可设置不同浓度,不同处理时间,对照孔中需加入适当的药物溶剂对照),继续按常规培养。到预定的检测时间点前1小时,从细胞培养箱里取出细胞培养板,在“样品**酶活性对照孔”中加入试剂盒提供的LDH释放试剂,加入量为原有培养液体积的10%。加入LDH释放试剂后,反复吹打数次混匀,然后继续在细胞培养箱中孵育。

c.到达预定时间后,将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔的上清液120μl,加入到一新的96孔板相应孔中,随即进行样品测定。

方法二:细胞内总LDH的检测

a.细胞毒性检测:根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中,使待检测时细胞密度不超过80-90%满。加入不同药物进行处理,并设置适当对照。药物刺激完毕后,将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清,加入150μl 用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀),适当摇晃培养板混匀,然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔的上清液120μl,加入到一新的96孔板相应孔中,随即进行样品测定。

b.细胞增殖检测:根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中,使促进细胞增殖的药物刺激后细胞不超过80-90%满为宜。使用不同的药物刺激细胞,并设置适当对照。药物刺激完毕后,将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清,加入150μl 用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀),适当摇晃混匀,然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔上清液120μl,加入到一新的96孔板相应孔中,随即进行样品测定。

  注:LDH释放检测更加常用一些,细胞内总LDH检测通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。


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